高保真PCR預混液(2×PCR Master Mix)

抗體參數
名稱 | 組分 | 規(guī)格 | 貨號 |
高保真PCR預混液 (2×PCR Master Mix) |
高保真酶、dNTP、Mg2+ | 1mL | M109T1 |
10mL |

產品介紹
本產品為2×濃度的PCR混合液,其除了含有PCR擴增常用的dNTP和Mg2+之外,還含有一種基于基因工程改造的新一代高保真酶,其具有極高的擴增效率和高保真性,同時增加的特殊擴增促進劑也使擴增效果進一步增加。此酶具有 5'→3'DNA聚合酶活性以及3'→5'外切酶活性,擴增產物為平末端,可用于后續(xù)同源重組等試驗。
產品應用
本品適用于以基因組DNA、cDNA、質粒等模板的PCR反應。
運輸與保存
-30°C~ -15°C保存,低溫運輸。
試驗操作
- 反應體系
組分 體積(μL) ddH2O Up to 50 2×PCR Master Mix 25 模板 X 正向引物(10 μM) 1 反向引物(10μM) 1 注:模板推薦量為基因組DNA:50-150ng;質粒:5-50ng;cDNA:1-5μl(不超過反應體積的1/10),使用前請于冰上融化,震蕩瞬時離心。
- 反應程序
程序 溫度(℃) 時間 循環(huán)數 預變性 95 3min 1 變性 95 15s 35 退火a 根據引物而定 15s 延伸b 72 15s 延伸 72 5min 1 保存 4 ∞ 1 a.退火溫度:一般設置為引物Tm值±3℃左右即可; b. 延伸時間:一般模板設置為15s/kb,對于一些困難模板,可延伸至20-30s/kb范圍之間調整。
注意事項
1. 請使用高質量模板。
2. 避免反復凍融此產品,因為這會降低酶的活性。
3. 此產品僅供科研使用,不適用于臨床診斷或治療。
4. 請勿將此產品用于任何非法目的。
常見問題及解決方法
常見問題 | 可能原因 | 解決方法 |
無擴增產物或產物量少 | 引物 | 重新設計優(yōu)化引物 |
退火溫度 | 設置梯度,尋找合適退火溫度 | |
引物濃度 | 適當提高引物濃度 | |
延伸時間 | 適當提高延伸時間 | |
循環(huán)數 | 適當提高循環(huán)數 | |
模板 | 適當增加模板量或提高模板純度 | |
條帶彌散或有雜帶 | 引物 | 重新設計優(yōu)化引物或適當降低引物濃度 |
退火溫度 | 適當提高退火溫度并尋找最適溫度 | |
延伸時間 | 根據雜帶大小而定,大于目的片段降低,小于目的片段提高延伸時間 | |
循環(huán)數 | 適當降低循環(huán)數 | |
模板 | 使用純度高的模板或適當降低模板量 |

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